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豬轉錄因子AP- 酶聯免疫elisa試劑盒保存標本要求
.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可向客服索取說明書》》 在線索取
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中 先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘。
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
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產品名稱:
英文名稱: AP- ELISA KIT
規(guī)格:96T/48T
存儲條件:2-8℃
有效期:6個月
特異性:本ELISA檢測試劑盒可同時檢測天然或重組的,且與其他相關蛋白無交叉反應。
檢測種屬:人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
適用范圍:此試劑盒僅用于科研實驗,禁用于臨床 。
類型和操作步驟
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體,
②酶標記的抗原或抗體,
③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
(一)雙抗體夾心法、
(二)一步法、
(三)間接法測抗體、
(四)競爭法。
技術流程:
一、雙抗體夾心法(檢測未知抗原)
、用緩沖液將抗體稀釋至-0ug/ml。在反應孔中加0.ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~小時,洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml,37℃ 0~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則40nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍,即為陽性。
二、間接法(檢測未知抗體)
、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至-0ug/ml, 每孔加0.ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml,37℃ 0~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則40nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍,即為陽性。
APP 重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-70, His & GST 標簽) BstXI
CD47 重組人 CD47 蛋白 (Fc 標簽) KspAI (HpaI)
TNFRSFB 重組人 TNFR2 / CD20b / TNFRSFB 蛋白 (aa -268, 96 Met/Arg, His 標簽) KspAI (HpaI)
PROC 重組人 PROC / Protein C / PROC 蛋白 (His 標簽) MnlI
IL2A & IL27B 重組人 IL2A & IL27B Heterodimer 蛋白 MnlI
ITGA5 & ITGB6 重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白 BseDI (BsaJI)
EDEM2 重組人 EDEM2 / C20orf3 蛋白 (His 標簽) BseDI (BsaJI)
DCUND 重組人 DCUND / SCCRO 蛋白 (His 標簽) PauI (BssHII)
ARF5 重組人 ARF5 / ADP-ribosylation factor 5 蛋白 (His 標簽) PauI (BssHII)
CBR3 重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標簽) HphI
STX3 重組人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 (His 標簽) HphI
MAPRE3 重組人 MAPRE3 / EB3 蛋白 (His 標簽) RsaIZamboni 固定液 250 mL
CAS59-43-8 維生素 B 0g
2-000-5 成骨細胞生長因子 5mL
20720-50 柱式凍存血液 DNAout 50 次
醛縮酶 00mg
dCTP 溶液,00mM 0.5mL
RNase-free Tris HCl,M,pH 8.5 00mL
RecJf 核酸外切酶 000U
CAS590-46-5 甜菜堿鹽 00g
2-265 EBY00 酵母菌種 mL
一管式拭子 DNAout 20 次
可逆性銅染試劑盒 套
葡聚糖 T-0 0g
F2K 培養(yǎng)基 ( 含 % 雙抗 ) 500mL
柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒 50 次
05-500 MTT 檢測試劑盒 500 次
70503T-50 DNA 電泳分子量標準 (250-500 bp) 50 次
化蛋白 G 0.5mg