細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

水牛細(xì)胞;BWEL

商品屬性

商品介紹

細(xì)胞別稱；BWEL；水牛細(xì)胞

種屬來源；水牛

生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)；無

培養(yǎng)基；BWEL水牛細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

RAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)重組蛋白 Recombinant RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37)

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ST6GAL1重組小鼠 ST6GAL1 / CD75 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

PDGFB Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PDGFB / PDGF-BB 蛋白

CRELD1重組人 CRELD1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

PDGFC重組小鼠 PDGF-C / SCDGF 蛋白  Protein

肌肌酸激酶(CKM)天然蛋白 Native Creatine Kinase, Muscle (CKM)

SLITRK6重組人 SLITRK6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TEK Protein Rat 重組大鼠 Tie2 / TEK 蛋白

豬腸三葉因子(ITF)ELISA 試劑盒

Human Legionella aibody IgA (LP Ab-IgA) ELISA Kit 人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)檢測(cè)試劑盒

Porcinecholecystokinin,CCKELISAKit 豬膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforALPELISAKit大鼠堿性0酸酶

血液卵0脂乙酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)檢測(cè)試劑盒

水牛細(xì)胞;BWEL中文名稱   方法   規(guī)格

小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISAKit   ELISA. 

小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISAKit   ELISA. 

小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISAKit   ELISA.

大鼠鈣粘蛋白EGF大鼠LAG七經(jīng)G-型受體2(CELSR2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CELSR2 ELISA Kit

Rat alpha glucosidase (alpha -glucosidase) ELISA Kit 大鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)檢測(cè)試劑盒

RatErythropoietieceptor,EPORELISAKit 大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforEELISAKit大鼠雌激素

細(xì)胞培養(yǎng)懸液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次

Rathydroxyproline,HypELISAKit大鼠羥脯(Hyp)檢測(cè)試劑盒